Klonierung des Phosphatidylinositol binding clathrin assembly proteins (PICALM) und Untersuchung der Interaktion mit dem Protein APP in Verbindung mit der Alzheimer Krankheit

Bachelorarbeit aus dem Jahr 2011 im Fachbereich Medizin - Neurologie, Psychiatrie, Schte, Note: 1,3, Universitt Ulm (Experimentelle Neurologie), Veranstaltung: Molekular-Medizin, Sprache: Deutsch, Abstract: Die Alzheimer Krankheit (AD) ist die hufigste neurodegenerative Erkrankung der westlichen Welt, die Hauptursache von Demenz und daher mit enormen Kosten fr das Gesundheitssystem verbunden. Dem Amyloid Precursor Protein (APP) kommt dabei eine Schlsselrolle zu: ber Prozessierung durch BACE1 und anschlieend durch die -Sekretase werden daraus A Peptide gebildet, die in den fr die Erkrankung typischen senilen Plaques akkumulieren. Dafr werden sowohl APP als auch BACE1 von der Zelloberflche ber Clathrin-vermittelte Endocytose (CVE) aufgenommen und zur amyloidogenen APP-Prozessierung in intrazellulre Kompartimente transportiert.
Krzlich konnten in mehreren genomweiten Assoziationsstudien SNPs im PICALM-Locus mit der AD signifikant assoziiert werden. PICALM ist homolog zum Clathrin-Adaptorprotein AP180 und wohl am Prozess der CVE beteiligt, da diese durch PICALM-berexpression gehemmt wird. Welche Rolle PICALM hierbei zukommt ist noch nicht vollstndig geklrt.
Um erste Einsichten in den Zusammenhang zwischen der AD und PICALM zu erlangen wurde in dieser Arbeit die Interaktion zwischen PICALM und APP auf Proteinebene untersucht. Dazu wurde ber Klonierung zunchst ein Plasmid-Expressionsvektor etabliert, mit dem sich PICALM in HEK- und N2A-Zellen berexprimieren lie. In bereinstimmung mit der Literatur zeigte sich per Fluoreszenzmikroskopie eine hauptschlich perinuklere Hufung von berexprimiertem PICALM. Es konnte gezeigt werden, dass zunehmende Mengen des Proteins zu einer stetigen Abnahme der endogenen APP-Proteinlevel in HEK-Zellen fhren, was umgekehrt jedoch nicht der Fall war. Kolokalisationsstudien von PICALM und APP lassen darauf schlieen, dass beide Proteine eher nicht direkt miteinander interagieren.
Schlielich ist dies die erste Studie,