Mikrochemische Methoden fr neurobiologische Untersuchungen

1. Blindwert: Standard-Homogenat 5 min bei 95 DegreesC erhitzen. Man findet ca. 0.2% der eingesetzten Radioaktivitat. 2. Rohrchen beim Dekantieren gut abtropfen lassen, am besten auf Kleenex. 3. Falls die Bestimmung erst spater erfolgen soll, konnen die Rohrchen nach dem Stoppen mit Trichloressigsaure bei -30 DegreesC flir einige Tage gelagert werden. Pro Person und Arbeitstag konnen ca. 70 PK-Bestimmungen (mit Doppelwerten) durchgeflihrt werden. 32 Die Trennung von radioaktivem Ausgangsprodukt (y_ p-ATP) und 2 Endprodukt (3 p-Histonphosphat) erreichen J.J. Witt und R. Ros- koski Jr. (1975) auf einfache Weise. Nach Adsorption des 32p_ 2 Histonphosphats an Cellulosephosphat-Papier werden 3 p-ATP und wasserlosliche Metabolite ausgewaschen und das phosphorylierte Histon im Szintillations-Spektrometer gezahlt (Rapid protein kinase assay using phosphocellulose paper absorption. Anal Biochem 66:252-258). Einen im Prinzip ahnlichen Proteinkinase-Test beschreiben K.-P. Huang und J.C. Robinson (1976) (A rapid and sensitive assay me- thod for protein kinase. Anal Biochem 72:593-599). 36. Proteincarboxymethylase (PCM1) (optimiert fur Hypophyse der Ratte) Modifikation der Methode von Diliberto EJ Jr, Viveros OH, Axelrod J (1976) Subcellular dis- tribution of protein carboxymethylase and its endogenous sub- strates in the adrenal medulla: possible role in excitation- secretion coupling. Proc Natl Acad Sci USA 73:4050-4054 (Protein-O-Methyltransferase 2.1.1.24) Vorkommen des Enzyms Hypophyse, Schilddrlise, Herz, Nebenniere, Thrombozyt, Erythrozyt. Substrate Hormone der Adenohypophyse: LH, FSH, ACTH, STH, Prolaktin sowie Eialbumin, Gelatine Inhibitoren Nicht bekannt.